起：やってきた弟はネズミ・スチュワートだった

ニューヨーク・セントラルパーク近くのリトル一家は、パパ（ヒュー・ローリー）とママ（ジーナ・デイヴィス）、息子のジョージ（ジョナサン・リプニッキ）の3人家族。「弟が欲しい！」というジョージの希望もあり、パパとママは養子縁組みをすることに。

ジョージはかねてより一緒に遊べるような弟を欲しがっており、そのため、リトル夫妻は児童養護施設に訪れる。 夫妻の傍らで「家族になるべき子なら、見つけた瞬間に心が感じるはず」と、子供達と同じ制服を着た小さな白いねずみからアドバイスを受ける。そのねずみ＝スチュアートに運命を感じた夫妻は、彼を引き取りジョージの弟とすることに決める。

承：ジョージ、弟としてスチュワートを認める

スチュアートは賢く、優しい心の持ち主。だが、ジョージは新たな弟がネズミと知ってがっかりし、飼い猫・スノーベルもひがんで彼をいじめる。だが、スチュアートはめげず、リモコンのヨットレースに参加するジョージに協力して、いじめっ子のヨットをみごと追い抜いて優勝し、ジョージと心通わせる。

転：飼い猫・スノーベルの策略

飼い猫・スノーベル以外は全てスチュワートの存在を認める状況になり、困ったスノーベルは、ノラ猫のボスに相談。野良猫グループは一計を考じ、スチュアートのニセの両親を仕立て上げ、リトル家に送り込む。「本当の両親が現れた」と騙されたリトル家の人々は、泣く泣くスチュアートを手離す。

結：リトル家の一員としてスチュワートは帰ってくる

嘘に気づいたリトル夫妻は、スチュアート探しに奔走する。スチュアートもニセ両親が本当の両親ではないことを知る。ニセ者は改心し、スチュアートは自由の身となる。野良猫グループの追跡をかわし、スノーベルとも分かり合うことができたスチュアートは、「リトル家の一員」として、楽しく暮らして行くのだった。

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